重疊延伸PCR技術(shù)是采用具有互補(bǔ)末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸，將不同來源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來的技術(shù)，可通過定點(diǎn)誘變在體外改造DNA分子，并將改造后的目的基因?qū)胭|(zhì)粒構(gòu)建目的基因表達(dá)載體。
（1）如圖所示的重疊延伸PCR技術(shù)中，PCR1的引物是 引物A、引物C引物A、引物C。PCR4可獲得大量定點(diǎn)誘變目的基因，此時的引物為 引物C、引物D引物C、引物D。PCR3時模板DNA不能選擇DNA分子③的原因是 子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時子鏈不能延伸子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時子鏈不能延伸。
（2）為使重疊延伸PCR技術(shù)改造后的目的基因（該基因序列不含圖中限制酶的識別序列）能與載體正確連接，PCR4時，應(yīng)在基因上、下游引物的 5′5′端分別添加限制酶 KpnⅠ、EcoRⅠKpnⅠ、EcoRⅠ的酶切位點(diǎn)。
（3）將目的基因、質(zhì)粒及大腸桿菌混合，溫育一段時間后涂在含四環(huán)素的平板上培養(yǎng)，一段時間后平板上長出菌落。這些菌落的菌體內(nèi) 不一定不一定（填“一定”、“不一定”）含有目的基因，理由是 含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物A、引物C；引物C、引物D；子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時子鏈不能延伸；5′；KpnⅠ、EcoRⅠ；不一定；含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：44引用：2難度：0.7
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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