人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白如圖表示利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的部分過程，圖中Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?；卮鹣铝袉栴}：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識(shí)別序列 及切割位點(diǎn)

（1）一個(gè)基因表達(dá)載體的組成必須有啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)、

標(biāo)記基因

標(biāo)記基因

、

目的基因

目的基因

等。若選用牛作為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可將人乳鐵蛋白基因與

牛乳腺蛋白基因

牛乳腺蛋白基因

的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，可通過

顯微注射

顯微注射

方法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵中，然后使其發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。
（2）據(jù)圖分析，篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞首先需要在含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

（填“四環(huán)素”“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培養(yǎng)基上進(jìn)行，原因是

用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會(huì)破壞Amp^r基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞，能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來

用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會(huì)破壞Amp^r基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞，能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來

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（3）若要檢測轉(zhuǎn)基因動(dòng)物DNA上是否插入了目的基因，檢測方法是采用DNA分子雜交技術(shù)，即用

放射性同位素（或熒光物質(zhì)等）

放射性同位素（或熒光物質(zhì)等）

標(biāo)記的

人乳鐵蛋白基因（目的基因）

人乳鐵蛋白基因（目的基因）

作探針，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因已插入染色體DNA中。
（4）利用轉(zhuǎn)基因大腸桿菌（工程菌）不能生產(chǎn)有活性的人乳鐵蛋白，這是因?yàn)?

大腸桿菌為原核生物，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不具備加工人乳鐵蛋白的能力

大腸桿菌為原核生物，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不具備加工人乳鐵蛋白的能力

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