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基因定點(diǎn)整合可替換特定基因,該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由PKU基因突變引起的,將正常PKU基因定點(diǎn)整合到PKU基因突變的小鼠胚胎干細(xì)胞的染色體DNA上,替換突變基因,可用來研究該病的治療過程。定點(diǎn)整合的過程是:從染色體DNA的突變PKU基因兩側(cè)各選擇一段DNA序列HB1和HB2,根據(jù)其堿基序列分別合成HB1和HB2,再將兩者分別與基因K1、K2連接,中間插入正常PKU基因和標(biāo)記基因neor,構(gòu)建出如圖所示的重組載體。重組載體和染色體DNA中的HB1和HB2序列發(fā)生交換,導(dǎo)致兩者之間區(qū)域發(fā)生互換,如圖所示?;卮鹣铝袉栴}:
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(1)構(gòu)建重組載體,常用的工具酶有
限制酶、DNA連接酶
限制酶、DNA連接酶
。構(gòu)建重組載體時(shí),需要大量PKU基因,常用
PCR
PCR
技術(shù)合成PKU基因,利用該方法合成PKU基因時(shí)需要設(shè)計(jì)并合成
2
2
種引物。
(2)題干中所用胚胎干細(xì)胞可以來自
早期胚胎或原始性腺
早期胚胎或原始性腺
。培養(yǎng)過程中大部分細(xì)胞會貼附在培養(yǎng)瓶壁生長,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會停止分裂,這種現(xiàn)象稱為
接觸抑制
接觸抑制
。
(3)實(shí)驗(yàn)過程中,為了提高胚胎的利用率,可采用胚胎分割技術(shù),若選用囊胚期的胚胎,操作過程中要特別注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割,原因是
保證分割后的每一個(gè)胚胎的恢復(fù)和正常發(fā)育
保證分割后的每一個(gè)胚胎的恢復(fù)和正常發(fā)育
。
(4)用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細(xì)胞時(shí),會出現(xiàn)PKU基因錯(cuò)誤整合。錯(cuò)誤整合時(shí),載體的兩個(gè)K基因中至少會有一個(gè)與neor一起整合到染色體DNA上。已知含有neor的細(xì)胞具有G418的抗性。Kl、K2的產(chǎn)物都能把DHPG轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡。轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞依次在含有G418及同時(shí)含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),在雙重選擇下存活下來的是
正確整合
正確整合
(填“正確整合”或“錯(cuò)誤整合”)的胚胎干細(xì)胞,理由是
能在含有G418的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor,能在同時(shí)含G418和DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor且不含K基因
能在含有G418的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor,能在同時(shí)含G418和DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor且不含K基因

【答案】限制酶、DNA連接酶;PCR;2;早期胚胎或原始性腺;接觸抑制;保證分割后的每一個(gè)胚胎的恢復(fù)和正常發(fā)育;正確整合;能在含有G418的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor,能在同時(shí)含G418和DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞中含有neor且不含K基因
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:38引用:4難度:0.7
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