普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纖維細胞中特異性表達，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導入棉花細胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖。請分析回答：
（1）纖維細胞E6啟動子的元素組成為 C、H、O、N、PC、H、O、N、P，基因表達載體除了圖示組成外，至少還有 復制原點、終止子、標記基因復制原點、終止子、標記基因等（至少答兩個），不能使用質(zhì)粒1中花椰菜病毒啟動子的原因是 纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA。
（2）PCR技術(shù)擴增β-甘露糖苷酶基因需要根據(jù) GhMnaA2兩端部分核苷酸序列GhMnaA2兩端部分核苷酸序列設(shè)計特異性引物序列，假設(shè)開始時模板DNA數(shù)量為m個，PCR擴增5個循環(huán)，理論上需要的引物數(shù)量 62m62m，只含目的基因的片段數(shù)量為 22m22m。為保證ChMnaA2能插入到質(zhì)粒2中，還需要在引物的 5′5′端添加限制酶識別序列。
（3）為什么不能用GhMnaA2探針進行DNA分子雜交來鑒定基因表達載體是否導入棉花細胞？因為棉花細胞中本來就有GhMnaA2，不管是否導入都能與該探針發(fā)生堿基互補配對因為棉花細胞中本來就有GhMnaA2，不管是否導入都能與該探針發(fā)生堿基互補配對。
（4）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達載體獲得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四種長度的DNA片段，則用NotI酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是 5.9kb5.9kb和 11.8kb11.8kb。
（5）導入細胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維變長的原理是 反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達（翻譯）反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達（翻譯）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】C、H、O、N、P；復制原點、終止子、標記基因；纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA；GhMnaA2兩端部分核苷酸序列；62m；22m；5′；因為棉花細胞中本來就有GhMnaA2，不管是否導入都能與該探針發(fā)生堿基互補配對；5.9kb；11.8kb；反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達（翻譯）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/12/19 21:30:2組卷：36引用：3難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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