堿性蛋白酶廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療等行業(yè)。為了實現(xiàn)低成本高產(chǎn)量的目標(biāo)，研究人員通過誘變技術(shù)獲得高效分泌堿性蛋白酶的地衣芽孢桿菌，再利用基因工程手段將該地衣芽孢桿菌的堿性蛋白酶基因（Apr）導(dǎo)入大腸桿菌，構(gòu)建了表達(dá)胞外堿性蛋白酶的重組菌株?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在誘變技術(shù)處理的過程中，地衣芽孢桿菌發(fā)生了 基因突變基因突變（填“變異類型”）。由于該種變異具有 不定向性不定向性的特點，故誘變后還需經(jīng)過 篩選篩選才有可能獲得高效分泌堿性蛋白酶的芽孢桿菌。
（2）Apr基因兩端的核苷酸序列已知，如圖1所示。利用PCR技術(shù)擴增Apr基因所需要的引物是下列中的 ABAB。
A．5′-GGATCTAACGCGATACGC-3′
B．5′-CTCGAGCCGGAAATACTT-3′
C．5′-AAGTATTTCCGGCTCGAG-3′
D．5′-GCGTATCGCGTTAGATCC-3′
（3）PCR擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果顯示，除目的基因條帶外，還有2條非特異條帶，可能的原因有：①②①②（填序號），導(dǎo)致引物與模板中的非目的基因片段結(jié)合。
①引物序列較短
②引物和模板不完全配對
③復(fù)性溫度過高
（4）構(gòu)建基因表達(dá)載體時需要的工具酶有 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶。如圖是2已構(gòu)建的重組表達(dá)載體pET-28b（+）-Apr示意圖，研究人員用XhoⅠ和NcoⅠ兩種酶（酶切位點見圖2，數(shù)字代表該位點與復(fù)制原點的距離）對重組菌株的DNA進(jìn)行雙酶切，若得到約為 11101110bp和 52315231bp的DNA片段，則初步表明目的基因已成功導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】基因突變；不定向性；篩選；AB；①②；限制酶、DNA連接酶；1110；5231
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.5
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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