P24是HIV病毒顆粒的主要結構蛋白（大小約為26KD），是P24基因的表達產物。P24單克隆抗體在HIV感染的診斷、治療等方面有重要意義，P24單克隆抗體的制備主要包括三個階段：利用基因工程生產P24蛋白；利用細胞融合技術生產單克隆抗體；單克隆抗體活性的鑒定。請回答下列問題：
（1）提取HIV的總RNA，經 逆轉錄逆轉錄過程獲得總cDNA。通過PCR技術可在總cDNA中專一性的擴增出P24基因的cDNA，原因是 引物是根據(jù)P24基因對應的cDNA的一段已知序列設計合成的（含有/加入了能與之特異性結合的引物）引物是根據(jù)P24基因對應的cDNA的一段已知序列設計合成的（含有/加入了能與之特異性結合的引物）。
（2）在構建重組質粒時，需對質粒和P24基因的cDNA用BamHI和XhoI進行雙酶切，雙酶切的優(yōu)點是 防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及質粒和目的基因的反向連接防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及質粒和目的基因的反向連接研究發(fā)現(xiàn)，P24基因的cDNA缺乏這兩種限制酶的識別序列。為此，在設計PCR引物時，需要 在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識別序列在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識別序列。
（3）將重組質粒（含卡那霉素抗性基因）導入宿主菌體細胞后，進行的部分操作及結果如圖所示。圖中①②兩處的接種方法 不同不同（填“相同”或“不同”），在固體平板培養(yǎng)基上能生長的菌落不一定能合成P24，其原因是 重組質粒表達了卡那霉素抗性基因，但不一定表達了P24基因重組質粒表達了卡那霉素抗性基因，但不一定表達了P24基因。蛋白凝膠分析結果圖中，1為蛋白Marker,2為不含物質A的菌液，3為含物質A的菌液，實驗結果說明P24較高的是 33（填“2”或“3”），據(jù)此推測物質A的作用是 物質A能誘導P24基因的表達物質A能誘導P24基因的表達。
（4）用P24蛋白對小鼠以靜脈注射的方式進行加強免疫3次，其目的是 促使小鼠產生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細胞促使小鼠產生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細胞。取免疫后小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞，用 仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激法仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激法促融，并經HAT培養(yǎng)基篩選獲得雜交瘤細胞。進一步篩選時，需先對含雜交瘤細胞的培養(yǎng)液進行稀釋，然后用抗原—抗體雜交技術進行檢測，篩選出具有 能產生P24抗體（又能無限增殖）能產生P24抗體（又能無限增殖）特性的細胞。再將所得細胞進行克隆培養(yǎng)，進而獲得P24單克隆抗體?？寺∨囵B(yǎng)的關鍵是 保證分離出來的細胞是一個而不是多個保證分離出來的細胞是一個而不是多個。
（5）T細胞被HIV感染后，會與未被感染的T細胞發(fā)生融合，從而形成多核巨細胞，多核巨細胞不久死亡又釋放出大量新病毒。多核巨細胞的數(shù)量可作為P24單克隆抗體活性鑒定的指標。請完善以下鑒定P24單克隆抗體活性的實驗思路：
①將未被感染的T細胞等分為三組，處理如下：
A組：HIV感染的T細胞+未被感染的T細胞+細胞培養(yǎng)液；
B組：HIV感染的T細胞+未被感染的T細胞+P24單克隆抗體P24單克隆抗體；
C組：未被感染的T細胞+細胞培養(yǎng)液；
②48小時內每隔8小時測定三組的多核巨細胞的數(shù)量，并進行統(tǒng)計分析。若P24單克隆抗體能有效抑制多核巨細胞的形成，請預測實驗結果 
（以坐標曲線圖的形式畫出）。
【答案】逆轉錄；引物是根據(jù)P24基因對應的cDNA的一段已知序列設計合成的（含有/加入了能與之特異性結合的引物）；防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及質粒和目的基因的反向連接；在引物中加入限制酶BamHI和XhoI的識別序列；不同；重組質粒表達了卡那霉素抗性基因，但不一定表達了P24基因；3；物質A能誘導P24基因的表達；促使小鼠產生更多的（能分泌抗P24抗體的）B細胞；仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激法；能產生P24抗體（又能無限增殖）；保證分離出來的細胞是一個而不是多個；P24單克隆抗體；
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：2難度：0.6
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細胞表面的信號調節(jié)蛋白結合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。肺癌、結腸癌等多種腫瘤細胞表面的CD47含量比正常細胞高1.6～5倍，導致吞噬細胞對腫瘤細胞的清除效果減弱?？茖W家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進行了實驗。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．使用高效的細胞毒素藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應用。抗體一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7 -
3．雙特異性抗體是指一個抗體分子可以與兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位相結合，目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長春花是原產于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細胞技術（免疫的B淋巴細胞和雜交瘤細胞雜交技術）生產能同時識別癌胚抗原和長春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請分析回答下列問題：
（1）與植物體細胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。
（2）對③篩選出的雜交瘤細胞，還需進行和，才能篩選出足夠量的既能無限增殖又能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是（答出一點）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內需要經過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細胞。體外培養(yǎng)到一定時期的單克隆雜交—雜交瘤細胞會因為、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質缺乏等因素而分裂受阻，需進行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長春堿相比，將長春堿與雙特異性單克隆抗體結合后給藥，對人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5