CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯技術(shù)是近年來(lái)頗受關(guān)注的一項(xiàng)新技術(shù)。該基因表達(dá)系統(tǒng)主要包含引導(dǎo)RNA和Cas9蛋白兩個(gè)部分，引導(dǎo)RNA能識(shí)別并結(jié)合特定的DNA序列，從而引導(dǎo)Cas9蛋白結(jié)合到相應(yīng)位置并剪切DNA，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因序列的編輯。研究人員試圖用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)水稻產(chǎn)量基因Q基因進(jìn)行編輯，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）研究發(fā)現(xiàn)，CRISPR/Cas9僅存在于原核生物，故需借助轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因技術(shù)才能在水稻細(xì)胞中發(fā)揮作用。Cas9蛋白與限制酶限制酶酶的功能相似。
（2）首先依據(jù)Q基因Q基因的部分序列設(shè)計(jì)DNA片段A（負(fù)責(zé)編碼相應(yīng)引導(dǎo)RNA），再將片段A與含有Cas9基因的質(zhì)粒B連接，以構(gòu)建編輯水稻Q基因的CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因表達(dá)載體（如圖所示）。位點(diǎn)Ⅰ、位點(diǎn)Ⅱ分別表示酶切位點(diǎn)KpnⅠ、BamHⅠKpnⅠ、BamHⅠ。
（3）質(zhì)粒B大小為2.5kb（位點(diǎn)Ⅰ與位點(diǎn)Ⅱ相隔60b），經(jīng)酶切后的片段A大小為0.5kb（千堿基對(duì)），連接形成的表達(dá)載體大小為2.94kb2.94kbkb。
（4）常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胨臼荏w細(xì)胞，依據(jù)農(nóng)桿菌的侵染特點(diǎn)，目的基因?qū)⒉迦氲絋i質(zhì)粒的T-DNAT-DNA上，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化作用，進(jìn)入水稻細(xì)胞，并將其插入到水稻細(xì)胞染色體的DNA上水稻細(xì)胞染色體的DNA上，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。
（5）CRISRP/Cas9基因編輯技術(shù)有時(shí)存在編輯對(duì)象出錯(cuò)而造成脫靶，試從引導(dǎo)RNA的角度分析脫靶的原因其他DNA序列也含有與引導(dǎo)RNA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成引導(dǎo)RNA錯(cuò)誤結(jié)合而脫靶其他DNA序列也含有與引導(dǎo)RNA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成引導(dǎo)RNA錯(cuò)誤結(jié)合而脫靶。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】轉(zhuǎn)基因；限制酶；Q基因；KpnⅠ、BamHⅠ；2.94kb；T-DNA；水稻細(xì)胞染色體的DNA上；其他DNA序列也含有與引導(dǎo)RNA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成引導(dǎo)RNA錯(cuò)誤結(jié)合而脫靶
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：39引用：6難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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