科研人員研究調(diào)控蔗糖轉(zhuǎn)移酶基因（SUC2）的兩種蛋白質(zhì)Snf1和Snf2之間的相互作用的原理如下：真核細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有轉(zhuǎn)錄激活因子的參與。酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4在結(jié)構(gòu)上是組件式的，由DNA結(jié)構(gòu)功能域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）組成。兩個結(jié)構(gòu)域分開時不能激活轉(zhuǎn)錄，只有當(dāng)兩者空間上接近時，才具有GAL4轉(zhuǎn)錄因子活性。BD與基因上游激活序列UAS結(jié)合后，激活A(yù)D與啟動子結(jié)合，使啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄。如圖1為研究相互作用的X蛋白和Y蛋白的機(jī)制模式圖。

（1）操作中，需要用

限制酶和DNA連接

限制酶和DNA連接

酶將目的基因分別插入到酵母表達(dá)載體中，得到兩種融合表達(dá)載體（如2圖）。酶切時通常選用兩種不同的酶，這樣做的目的是

產(chǎn)生不同的黏性末端，保證目的基因按正確的方向連接；防止自身環(huán)化

產(chǎn)生不同的黏性末端，保證目的基因按正確的方向連接；防止自身環(huán)化

。
（2）酵母染色體上能被GAL4激活轉(zhuǎn)錄，顯示兩種蛋白質(zhì)相互作用的基因稱為報告基因。若用AUR1-C（抗生素AbA抗性基因）和HIS3（組氨酸合成基因）作為報告基因，那么作為被轉(zhuǎn)化的酵母細(xì)胞在抗生素抗性和營養(yǎng)需求上應(yīng)滿足的條件是

無AbA抗性、組氨酸缺陷

無AbA抗性、組氨酸缺陷

。轉(zhuǎn)化后需要在添加

AbA和不含組氨酸

AbA和不含組氨酸

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)篩選。除此之外，還要將酵母的GAL4基因敲除，原因是

排除細(xì)胞內(nèi)源轉(zhuǎn)錄因子GAL4的影響

排除細(xì)胞內(nèi)源轉(zhuǎn)錄因子GAL4的影響

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（3）LacZ基因編碼產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色；否則菌落為白色?？蒲腥藛T采用LacZ作為報告基因，根據(jù)上述原理，驗證了蛋白質(zhì)Snf1和Snf2之間存在相互作用。寫出實驗思路并預(yù)期結(jié)果及推論。