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人體肝臟細(xì)胞中的乙醛脫氫酶2(ALDH2)是人體酒精代謝中的關(guān)鍵酶。研究人員利用定點(diǎn)誘變技術(shù)對ALDH2基因進(jìn)行改造后在大腸桿菌中表達(dá),獲得具有較好溶解性的乙醛脫氫酶2。所用質(zhì)粒和操作過程如圖。其中,Ampr為氨芐青霉素抗性基因,Tetr為四環(huán)素抗性基因。質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈,內(nèi)側(cè)鏈為b鏈。基因Ampr轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段。改造后的ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端(其中一條鏈)的序列為5′-ATCCATGCGCTC…(中間核苷酸序列)CAGTGAGTAGCG-3′。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見下表。請回答下列問題:
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限制酶 BamHⅠ PstⅠ XhoⅠ XbaⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)(5′→3′) G↓GATCC C↓TGCAG C↓TCGAG T↓CTAGA
(1)通過定點(diǎn)誘變技術(shù)可制備自然界原本
不存在
不存在
(選填“存在”或“不存在”)的蛋白質(zhì)。
(2)質(zhì)粒復(fù)制的模板鏈?zhǔn)?
a和b
a和b
(選填“a”、“b”、“a和b”、“a或b”)鏈,基因Tet轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于
b鏈
b鏈
的片段。若用Xh0I切割質(zhì)粒后,形成的單鏈末端堿基序列為
TCGA—
TCGA—

(3)過程②需要的酶是
限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶
限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶
。過程③常采用
CaCl2
CaCl2
處理以提高操作效果。經(jīng)過程④,在培養(yǎng)基上能形成菌落的大腸桿菌類型有
導(dǎo)入空白質(zhì)粒的和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的
導(dǎo)入空白質(zhì)粒的和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的

(4)為擴(kuò)增目的基因,某同學(xué)設(shè)計(jì)了如下六種PCR引物,其中可選用(符合題意)的一對引物是
②⑤
②⑤
(選填數(shù)字序號)。根據(jù)選定的引物,至少需經(jīng)過
6
6
次循環(huán),可獲得32個(gè)符合要求的目的基因。
①5′-TCTAGAATCCATGCGCTC-3′
②5′-TCTAGACGCTACTCACTG-3′
③5′-CTGCAGATCCATGCGCTC-3′
④5′-GGATCCCGCTACTCACTG-3′
⑤5′-GGATCCATCCATGCGCTC-3′
⑥5′-CTCGAGCGCTACTCACTG-3′

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】不存在;a和b;b鏈;TCGA—;限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶;CaCl2;導(dǎo)入空白質(zhì)粒的和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的;②⑤;6
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:59引用:3難度:0.6
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項(xiàng))等。
    (2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
     
    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對目的基因進(jìn)行篩選。
    (3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
     
    (填序號)。過程②③采用的方法是
     

    (4)⑤過程需要用到
     
    等植物激素,在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中,這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化,原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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