α-抗胰蛋白酶是一種主要由肝細(xì)胞合成的血漿蛋白，具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能。科研人員利用乳腺生物反應(yīng)器獲得了α-抗胰蛋白酶?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）將人正常干細(xì)胞系L-02培養(yǎng)在某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO₂的主要作用是

維持培養(yǎng)液的pH值

維持培養(yǎng)液的pH值

。待細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期，用

胰蛋白

胰蛋白

酶消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和離心收集，提取RNA，經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

（填過(guò)程）最終獲得α-抗胰蛋白酶基因。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-抗胰蛋白酶基因時(shí)，科研人員在兩個(gè)引物的

5'端

5'端

（填“5'端”或“3'端”）各添加一種限制酶的酶切位點(diǎn)，在該端添加的理由是

DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端

DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端

。α-抗胰蛋白酶基因兩端添加不同的限制酶切割位點(diǎn)的目的是

防止自身連接環(huán)化

防止自身連接環(huán)化

。
（3）將α-抗胰蛋白酶基因與牛乳腺中

乳蛋白

乳蛋白

的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，構(gòu)建成基因表達(dá)載體。若將α-抗胰蛋白酶基因直接導(dǎo)入牛受精卵中，往往不能獲得所需的轉(zhuǎn)基因牛，理由是

直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會(huì)被降解或不能表達(dá)

直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會(huì)被降解或不能表達(dá)

。
（4）將含基因表達(dá)載體的受精卵置于早期胚胎培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，早期胚胎進(jìn)行移植前，需進(jìn)行性別鑒定。性別鑒定的操作思路是

取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定

取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定

。
（5）轉(zhuǎn)基因牛成年后需對(duì)其α-抗胰蛋白酶基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，一般采用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

法。