癌癥的顯著特征是癌細(xì)胞在一個(gè)組織或器官中的惡性增殖。但超過(guò)99%由癌癥導(dǎo)致死亡的案例并不是因?yàn)樵l(fā)性腫瘤，而是因?yàn)檗D(zhuǎn)移瘤。一些癌細(xì)胞會(huì)從原發(fā)性腫瘤上脫落，這些癌細(xì)胞具備轉(zhuǎn)移和入侵能力，它們會(huì)進(jìn)入人體的血液和淋巴系統(tǒng)，形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）。它們可單獨(dú)移動(dòng)或組成小團(tuán)抵達(dá)其他器官（如骨髓、肝臟、肺和大腦等），并在那里形成轉(zhuǎn)移瘤。傳統(tǒng)影像學(xué)診斷方式在發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移瘤形成時(shí)往往已延誤最佳治療時(shí)機(jī)。而通過(guò)液體活檢，即檢測(cè)血液中存在的CTCs,有助于早期轉(zhuǎn)移腫瘤患者的診斷、監(jiān)測(cè)術(shù)后患者腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。請(qǐng)分析并回答下列相關(guān)問(wèn)題。
（1）CTCs表面的蛋白質(zhì)與正常細(xì)胞相比，通常會(huì)出現(xiàn)明顯改變，例如

糖蛋白減少

糖蛋白減少

，從而導(dǎo)致其具有轉(zhuǎn)移的特性。研究人員比較了上皮組織細(xì)胞來(lái)源的CTCs與正常白細(xì)胞相比，表面蛋白質(zhì)的一些改變，如表：
表 細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物表達(dá)差異

分類(lèi)	CD45	EpCAM
白細(xì)胞	+++	-
CTCs	-	+++

造成CTCs與正常白細(xì)胞細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物表達(dá)差異的根本原因主要是

原癌基因和抑癌基因

原癌基因和抑癌基因

發(fā)生突變，導(dǎo)致細(xì)胞的畸形分化。
（2）在臨床診斷中，常利用一種稱(chēng)為Cellsearch的方法，對(duì)被測(cè)人進(jìn)行血液檢測(cè)，對(duì)是否存在癌癥轉(zhuǎn)移的情況進(jìn)行診斷，方法如下：
①單克隆抗體的制備（流程如圖）

a.首先用CD45蛋白免疫小鼠，然后經(jīng)過(guò)①、②、③、④這幾個(gè)關(guān)鍵步驟，首先獲得大量單克隆抗體A；再用

EpCAM病毒表面的蛋白（如某些糖蛋白和酶）

EpCAM病毒表面的蛋白（如某些糖蛋白和酶）

免疫小鼠，經(jīng)過(guò)相同的步驟獲得單克隆抗體B。步驟①常常用與植物原生質(zhì)體融合不同的方法如用滅活的病毒促融，其原理是

滅活的病毒與細(xì)胞膜蛋白發(fā)生相互作用

滅活的病毒與細(xì)胞膜蛋白發(fā)生相互作用

，從而使細(xì)胞相互凝聚。
b.步驟②通常使用選擇培養(yǎng)基，主要目的是篩選出

雜交瘤細(xì)胞

雜交瘤細(xì)胞

。
c.步驟③主要需要經(jīng)過(guò)

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)

的兩項(xiàng)操作，并經(jīng)過(guò)多次篩選，最終獲得

能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞

能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞

。
d.步驟④是大規(guī)模培養(yǎng)，主要有兩種方式：

體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖

體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖

。
②免疫磁珠分離：取待測(cè)人員少量血液（一般7.5m1即可）于采集管內(nèi)，將與

單克隆抗體A

單克隆抗體A

相連的磁珠加入采集管，外加磁場(chǎng)使磁珠定向移動(dòng)到指定區(qū)域并取出，排除非腫瘤細(xì)胞干擾（負(fù)性篩選）；再將與

單克隆抗體B

單克隆抗體B

相連的磁珠加入采集管，外加磁場(chǎng)使磁珠定向移動(dòng)到指定區(qū)域取出，收集CTCs（陽(yáng)性富集）。
③對(duì)收集到的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并做出診斷，若出現(xiàn)

CTCs陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)

CTCs陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)

超出正常范圍，即可診斷發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
（3）Cellsearch具有比傳統(tǒng)檢測(cè)方式更早發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，特異性強(qiáng)、靈敏度高且需要血液量少等優(yōu)勢(shì)，但該系統(tǒng)在臨床上卻未得到充分的利用，請(qǐng)從以上內(nèi)容中尋找線索，推測(cè)原因：

單克隆抗體制備成本高；不同來(lái)源CTC具有不同表面抗原，診斷方式具有局限性等

單克隆抗體制備成本高；不同來(lái)源CTC具有不同表面抗原，診斷方式具有局限性等

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